Σετ καθαρού κυττάρου/βακτηρίων RNAprep

Α-1 Κυτταρική λύση ή ομογενοποίηση δεν επαρκεί

---- Μειώστε τη χρήση δείγματος, αυξήστε την ποσότητα του ρυθμιστικού λύσης, αυξήστε την ομογενοποίηση και το χρόνο λύσης.

A-2 Το ποσό του δείγματος είναι πολύ μεγάλο

---- Μειώστε την ποσότητα του δείγματος που χρησιμοποιήθηκε ή αυξήστε την ποσότητα του ρυθμιστικού λύσης.

Α-1 Ανεπαρκής κυτταρική λύση ή ομογενοποίηση

---- Μειώστε τη χρήση δείγματος, αυξήστε την ποσότητα του ρυθμιστικού λύσης, αυξήστε την ομογενοποίηση και το χρόνο λύσης.

A-2 Το ποσό του δείγματος είναι πολύ μεγάλο

---- Ανατρέξτε στη μέγιστη ικανότητα επεξεργασίας.

Το R-A-3 δεν εκλούεται πλήρως από τη στήλη

---- Αφού προσθέσετε νερό χωρίς RNase, αφήστε το για λίγα λεπτά πριν από τη φυγοκέντρηση.

Α-4 Αιθανόλη στο υγρό έκλουσης

---- Μετά το ξέπλυμα, φυγοκεντρήστε ξανά και αφαιρέστε το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης όσο το δυνατόν περισσότερο.

Το μέσο καλλιέργειας κυττάρων A-5 δεν αφαιρείται εντελώς

---- Κατά τη συλλογή κυττάρων, βεβαιωθείτε ότι έχετε αφαιρέσει το μέσο καλλιέργειας όσο το δυνατόν περισσότερο.

A-6 Τα κύτταρα που αποθηκεύονται στο RNAstore δεν φυγοκεντρούν αποτελεσματικά

---- Η πυκνότητα του RNAstore είναι μεγαλύτερη από το μέσο μέσο κυτταρικής καλλιέργειας. άρα η φυγόκεντρη δύναμη πρέπει να αυξηθεί. Προτείνεται η φυγοκέντρηση στα 3000x g.

A-7 Χαμηλή περιεκτικότητα σε RNA και αφθονία στο δείγμα

---- Χρησιμοποιήστε ένα θετικό δείγμα για να προσδιορίσετε εάν η χαμηλή απόδοση προκαλείται από το δείγμα.

A-1 Το υλικό δεν είναι φρέσκο

---- Οι νωποί ιστοί πρέπει να αποθηκεύονται σε υγρό άζωτο αμέσως ή να τοποθετούνται αμέσως στο αντιδραστήριο RNAstore για να διασφαλιστεί το αποτέλεσμα της εξαγωγής.

A-2 Το ποσό του δείγματος είναι πολύ μεγάλο

---- Μειώστε το ποσό δείγματος.

A-3 RNase contamination

---- Παρόλο που το ρυθμιστικό διάλυμα που παρέχεται στο κιτ δεν περιέχει RNase, είναι εύκολο να μολυνθεί η RNase κατά τη διαδικασία εξαγωγής και θα πρέπει να χειρίζεται με προσοχή.

Α-4 Ρύπανση ηλεκτροφόρησης

---- Αντικαταστήστε το ρυθμιστικό ηλεκτροφόρησης και βεβαιωθείτε ότι τα αναλώσιμα και το ρυθμιστικό φόρτωσης είναι απαλλαγμένα από μόλυνση RNase.

A-5 Υπερβολική φόρτωση για ηλεκτροφόρηση

---- Μειώστε την ποσότητα φόρτωσης δείγματος, η φόρτωση κάθε φρεατίου δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 2 μg.

Το ποσό δείγματος A-1 είναι πολύ μεγάλο

---- Μειώστε το ποσό δείγματος.

A-2 Ορισμένα δείγματα έχουν υψηλή περιεκτικότητα σε DNA και μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία με DNase.

---- Πραγματοποιήστε επεξεργασία DNase χωρίς RNase στο ληφθέν διάλυμα RNA και το RNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας για επακόλουθα πειράματα μετά τη θεραπεία ή μπορεί να καθαριστεί περαιτέρω με κιτ καθαρισμού RNA.

Για γυαλικά, ψημένα στους 150 ° C για 4 ώρες. Για πλαστικά δοχεία, βυθισμένα σε NaOH 0,5 Μ για 10 λεπτά, στη συνέχεια ξεπλένονται καλά με νερό χωρίς RNase και στη συνέχεια αποστειρώνονται για να απομακρυνθεί εντελώς η RNase. Τα αντιδραστήρια ή τα διαλύματα που χρησιμοποιούνται στο πείραμα, ειδικά το νερό, πρέπει να είναι απαλλαγμένα από RNase. Χρησιμοποιήστε νερό χωρίς RNase για όλα τα παρασκευάσματα αντιδραστηρίου (προσθέστε νερό σε καθαρή γυάλινη φιάλη, προσθέστε DEPC σε τελική συγκέντρωση 0,1% (V/V), ανακινήστε όλη τη νύχτα και αφήστε αυτόκλειστο).